· poliakrilamidgel akrilamid monomeri, polimerləşmənin başlanğıc materialı, katalizator və duz və tampon qarışığı hüququ ilə birlikdə olmalıdır.
· akrilamidvə BIS (N, N '- metilen ikiqat akrilamid) monomer formalı gel matrisidir.
· ammonium persulfat yapışan polimerləşmə prosesini başlayır.Yapışqanın hazırlanması üçün suda hazırlanmış 10% ammonium persulfat məhlulu lazımdır.Məlumatların əksəriyyəti aktiv istifadəyə ehtiyac olduğunu göstərirdi.Bununla belə, 10% məhlulu əhəmiyyətli dərəcədə aktivlik itirmədən bir neçə həftə ərzində 4℃ temperaturda yerləşdirilə bilər.10 ml-ə qədər doldurun və yapışqan yığılmadıqda atın.
İpucu: faizakrilamidardıcıllıqla yapışqan və protein yapışqan eyni deyil.Əvvəlcədən hazırlanmış akrilamid: BIS məhlulundan istifadə edirsinizsə, doğru şüşəni aldığınızdan əmin olun.
· TEMED (N, N, N ', N '- tetrametil etilendiamin) soyuducuya qoyulmuş qəhvəyi şüşədə katalizatordur.Yapışqan tökməzdən əvvəl əlavə edin.
· Elektroforezdə istifadə olunan poliakrilamid elektroforez şüşələri hər dəfə əvvəl və sonra yuyulmalıdır.Elektroforezdən sonra yumşaq fırça və parça ilə isti sabunlu suda yuyun, distillə edilmiş su ilə yuyun və quruyana qədər dayanın.
· İçi boş polimerlə nəm və toz səbəb ola bilər.Elektroforezdən əvvəl şüşə lövhəni şüşə təmizləyici ilə təmizləyin və yumşaq fırça ilə silin.Distillə edilmiş su ilə yuyun və kağız dəsmal ilə yaxşıca qurudun.Kağızla silməzdən əvvəl 70% etanol ilə yaxalamaq təmizlənməyə və qurutma prosesini sürətləndirməyə kömək edir.Ardıcıl olaraq akrilamid nümunələrini əlavə edin: BIS, su, bufer məhlulu, ammonium persulfat, TEMED.Yaxşı silkələyin və dərhal tökün.
Poliakrilamidin polimerləşmədən əvvəl deqazasiyası lazım deyil.(Oksigen polimerləşməni maneə törətdiyi üçün baloncukları çıxarmaq üçün əvvəllər akrilamid vakuuma yerləşdirilirdi.)
Üfüqi yapışqan nöqtə nümunəsi ipuçları.
· alt qutuya bir qara kağız parçası qoyun, daha aydın görmək üçün bəzi nümunə çuxurları etmək üçün qara fon.
· yapışqan çəni ilə doldurulmuş bufer, yalnız kolloid üzərində.
· kənarında işıq varsa, işıqları yandırın, işıq kolloid parlasın.Nümunəni pipetkaya çəkin.
· avtomatik pipetləmə qurğusundan istifadə etməklə.
· 10-200 mu 1 maye hərəkət nöqtəsi nümunə üzərindəki nöqtələrin çoxunda istifadə edilə bilər.Çox kiçik nümunə dəlikləri üçün (10μ1-dən az) yapışqan ardıcıllığı üçün istifadə edilən uzun pipet başlığı daha rahatdır.
· yavaş-yavaş hərəkət edən mayenin nəfəs alması, sadəcə nümunəyə batırılmış pipetləmə.Nümunə qliserinlə yapışqan görünə bilər və sürətli nasos hava qabarcıqlarını pipet başlığına çəkə bilər.
· Nümunələr pipetləmə başlığını tənəffüs etdikdən sonra maye başlığını borunun kənarında yumşaq bir şəkildə hərəkət etdirəcək və ya silmə kağızı maye başlığını damcıların xaricinə çəkəcək.Nümunəni udmamaq üçün diqqətli olun.
Nümunəni nümunə çuxuruna qoyun
· bir az təzyiq saxlamaq üçün pipetləmə cihazı, nümunələri daşqın mayenin başını bir az hərəkət etdirin.
· buferə daxil edilmiş pipetləmə başlığı ləkə dəliklərindən bir qədər yüksəkdir, müsbət təzyiqi qoruyun.Pipetin ucu kiçik bir çuxura daxil edilə bilər.
· yavaş-yavaş və davamlı olaraq nümunələri çıxarın.Pipetin ucu nöqtə nümunə çuxurunun üstündə yerləşdirilir və nümunə dəliyə batacaq.Nümunənin içəriyə itələmək əvəzinə nümunə çuxurunu doldurmaq üçün batmasına icazə verin.
· maye başlı nümunənin sonuncu damcısından sonra maye ikinci ayağa keçəcək, mayenin hərəkətini yavaş-yavaş qaldıracaq, tampondan çıxacaq.
Şaquli yapışqan nümunəsini necə etmək olar?
· iki şüşə parçası arasında əmələ gələn şaquli yapışqan nöqtəsi nümunəsi deşikləri.Çox nazik yapışqanda pipet başlığını hətta iki şüşə boşqab arasına daxil etmək mümkün deyil.Gliserinə diqqət yetirin!Pipet başını nümunə dəliyinin üzərinə qoyun və nümunə dəliyə batacaq.
· Point nümunəsi əvvəl, polipropilen asil gel nümunə deşik təmiz yaxalanır şaquli nöqtəsi qoymaq üçün əmin olun.Polimerləşməmiş akrilamid və nümunə dəliyinin dibində görünə bilən suyu yuyun.Su nümunə çuxurunu əhəmiyyətli dərəcədə kiçik edə bilər.25 ml və ya 50 ml şpris və 18 kalibrli iynə istifadə edin.Elektroforez tamponunu tökün və nümunə çuxurunu diqqətlə yuyun.
· Nümunə çuxurunu görmək çətin ola bilər, lakin eyni zamanda qalanı asandır.Həddindən artıq dəliklər varsa, nümunə tamponu bromofenol mavisi ilə sınaqdan keçirilə bilər.
Göndərmə vaxtı: 31 mart 2023-cü il